БИОХИМИЯ, 2002, том 67, вып. 8, с. 1071–1084
УДК 577.352.3
Взаимодействие экзогенного гипохлорита и гипохлорита, продуцируемого в системе миелопероксидаза + H2O2 + Cl–, с ненасыщенными фосфатидилхолинами
1 НИИ физико-химической медицины МЗ РФ
2 Российский государственный медицинский университет
3 Institute of Medical Physics and Biophysics, University of Leipzig
Поступила в редакцию 04.05.2001
После доработки 09.06.2001
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: гипохлорит, миелопероксидаза, фосфатидилхолин, ненасыщенные липиды, хлоргидрин, гликоль, эпоксид, лизофосфатидилхолин, MALDI-TOF (matrix assisted laser desorbtion/ionisation time-of-flight) масс-спектрометрия.
Аннотация
Методом масс-спектрометрии MALDI-TOF исследовано взаимодействие экзогенного гипохлорита, а также гипохлорита, продуцируемого в системе миелопероксидаза (МПО) + H2O2 + Cl–, с ненасыщенными фосфатидилхолинами в составе многослойных липосом, содержащих остатки олеиновой, линолевой и арахидоновой кислот. Показано, что при pH 7,4 гипохлорит реагирует с двойной связью олеиновой кислоты в составе 1-стеароил-2-олеил-sn-глицеро-3-фосфохолина с образованием в качестве основного продукта хлоргидрина олеиновой кислоты. Помимо этого зарегистрировано образование незначительного количества гликолей и эпоксидов. При реакции гипохлорита с 1-стеароил-2-линолеил-sn-глицеро-3-фосфохолином основными продуктами были моно- и дихлоргидрин линолевой кислоты. В масс-спектре присутствовали также сигналы от моногликоля, эпоксида и производных монохлоргидрина, содержащих гликоль или эпоксид. Основными продуктами в реакции гипохлорита с 1-стеароил-2-арахидонил-sn-глицеро-3-фосфохолином оказались: лизофосфатидилхолин (1-стеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин), моно-, ди- и трихлоргидрин. Обнаруживались также моногликоль и его производные, содержащие одну или две хлоргидриновые группы. Помимо этого были зарегистрированы карбонильные соединения (альдегид и кислота), образующиеся в результате разрыва двойной связи арахидоната в 5-м положении. Монохлоргидрин обнаруживался также при инкубации липосом, сформированных из 1-стеароил-2-олеил-sn-глицеро-3-фосфохолина, в присутствии системы МПО + H2O2 + Cl– при pH 6,0. Если в среде инкубации отсутствовал фермент или один из его субстратов (H2O2 или Cl–), а также если был добавлен ингибитор МПО – азид натрия или перехватчики гипохлорита – таурин или метионин, то образование монохлоргидрина не происходило. Эти результаты позволяют заключить, что именно гипохлорит, образующийся при МПО-катализе, приводит к образованию хлоргидрина. Таким образом, использование метода масс-спектрометрии MALDI-TOF позволило при физиологических значениях pH зарегистрировать в качестве продуктов реакции гипохлорита с ненасыщенными фосфатидилхолинами помимо хлоргидринов еще гликоли и эпоксиды. Впервые удалось установить, что гипохлорит вызывает разрыв двойной связи в полиненасыщенном фосфатидилхолине, а также приводит к образованию лизофосфатидилхолина.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.