БИОХИМИЯ, 2002, том 67, вып. 6, с. 804–809
УДК 577.152.3
Выделение и свойства нековалентного комплекса транскетолазы с РНК
Научно-исследовательский институт физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского, МГУ им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 10.04.2001
После доработки 16.04.2001
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: транскетолаза, тиаминдифосфат, РНК, круговой дихроизм, иммунохроматография, пекарские дрожжи.
Аннотация
Существенно упрощен метод выделения гомогенной транскетолазы из пекарских дрожжей с использованием иммуноаффинной хроматографии. Показано, что из свежих дрожжей транскетолаза выделяется в виде высокомолекулярного комплекса с РНК, который при хранении дрожжей распадается до низкомолекулярного комплекса, а затем до свободного фермента. Подобраны условия диссоциации комплекса и получения свободного фермента. Удельная активность высокомолекулярного комплекса снижена в 20–25 раз, а низкомолекулярного комплекса – в 3–5,5 раза, по сравнению со свободным ферментом. Для низкомолекулярного комплекса не меняется сродство к тиаминдифосфату (кофактору) и ксилулозо-5-фосфату (субстрату-донору), но увеличивается время связывания с кальцием (второй кофактор), необходимое для полного проявления ферментативной активности. Изменения спектра КД в области 300–360 нм при добавлении к апоферменту тиаминдифосфата, характеризующие образование каталитически активного холофермента, для низкомолекулярного комплекса существенно меньше, чем для свободного фермента.