БИОХИМИЯ, 2002, том 67, вып. 6, с. 785–797
УДК 577.152.1
Кинетика трансгидрогеназной реакции, катализируемой митохондриальной NADH : убихинон оксидоредуктазой (комплексом I)
Кафедра биохимии Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 11.04.2001
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: NADH : убихинон оксидоредуктаза, трансгидрогеназная реакция, кинетика, субмитохондриальные частицы, Комплекс I, трехсубъединичный флавопротеин.
Аннотация
Изучена кинетика NADH→3′-ацетилпиридинадениндинуклеотид (APAD+) трансгидрогеназной реакции (DD-реакции), катализируемой тремя препаратами митохондриальной NADH-дегидрогеназы: субмитохондриальными частицами (СМЧ), изолированным Комплексом I и трехсубъединичным фрагментом Комплекса I (FP). Показано, что Комплекс I (в составе СМЧ и изолированный) катализирует две NADH→APAD+ реакции, различающиеся по скорости и по сродству к нуклеотидам. Реакция 1, характеризуется высоким сродством к APAD+ (Km = 7 мкМ, для СМЧ) и низкой скоростью (Vm = 0,2 мкмоль/мин на 1 мг белка, для СМЧ) и протекает с образованием тройного комплекса. Реакция 2 характеризуется на порядок более высокой скоростью и плохим сродством к окисленному нуклеотиду (Vm = 1,7 мкмоль/мин на 1 мг белка и Km для APAD+ = 160 мкМ, для СМЧ). FP катализирует только реакцию 1. ADP-Рибоза ингибирует реакцию 1 по смешанному типу (конкурентному с неконкурентным), по отношению к NADH и APAD+, а реин конкурирует с обоими субстратами. Полученные результаты свидетельствуют в пользу существования по крайней мере двух нуклеотид-связывающих центров в составе Комплекса I.