БИОХИМИЯ, 2002, том 67, вып. 6, с. 741–749
УДК 577.152.3
Субстратная специфичность фосфодиэстеразы, гидролизующей связь между белком ВПг и РНК пикорнавирусов: минимальная нуклеиновая часть*
НИИ физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского
Поступила в редакцию 28.11.2001
После доработки 04.01.2002
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: фосфодиэстераза, субстратная специфичность, пикорнавирус, радиоиодирование, ковалентный комплекс РНК и белка.
Аннотация
В работе исследована субстратная специфичность клеточной фосфодиэстеразы, выделенной из клеток асцитной карциномы Кребс II. Фермент катализирует гидролиз фосфодиэфирной связи между остатком тирозина белка ВПг (вирусный протеин, связанный с геномом) и 5′-концевым остатком уридиловой кислоты РНК пикорнавирусов. Предполагается, что в клетках эукариот имеются субстраты, структурно подобные пикорнавирусному. Однако минимальная структура сложного вирусного субстрата, необходимая ферменту для гидролиза фосфодиэфирной связи между «узловыми» аминокислотным и нуклеотидным остатками, неизвестна. Для определения наименьшей нуклеиновой части субстрата использовали следующие производные комплекса ВПг-РНК вируса энцефаломиокардита: [125I]Кп-РНК (Кп – остаточные пептиды, связанные с РНК после обработки ВПг-РНК протеиназой К), [125I]Кп-pUpUpGp, [125I]Кп-pUp и [125I]Кп-pU. Исследуемый фермент отщепляет свободные К-петид(ы) от полноразмерной РНК и 5′-концевого тринуклеотида pUpUpGp со сравнимой эффективностью, тогда как соединение [125I]Кп-pUp расщепляется с заметно меньшей скоростью. Соединение [125I]Кп-pU в аналогичных условиях не гидролизуется ферментом. Таким образом, минимальной нуклеиновой частью субстрата [125I]Кп-РНК является pUp. В противоположность исходному комплексу [125I]ВПг-РНК и [125I]ВПг-рUpUpGpApApApGp, соединения [125I]ВПг-pU, [125I]ВПг-pUp и [125I]ВПг-pUpUpGp не гидролизуются исследуемым ферментом. Полноразмерный ВПг защищает фосфодиэфирную связь от гидролиза в ковалентном комплексе с коротким фрагментом РНК. Мы предполагаем, что клеточными субстратами фермента являются фосфодиэфиры олиго(поли)рибонуклеотидов и тирозина или же тирозин-содержащих пептидов. Обсуждается возможное участие необычной фосфодиэстеразы в репарации поврежденных ковалентных комплексов РНК и топоизомераз, предлагается гипотеза об ее участии в запуске процесса деградации пикорнавирусной РНК.
Текст статьи
Сноски
* Ускоренная публикация.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.