Выделение и характеристика прочно-сопряженных митохондрий Neurospora crassa дикого типа и мутанта nap

Аннотация

Разработан быстрый, легко воспроизводимый метод выделения прочно-сопряженных митохондрий из клеток Neurospora crassa дикого типа и мутанта nap, выращенных на разных стадиях роста. Выделенные митохондрии сохраняли регуляцию метаболического состояния, имели высокие скорости дыхания и величины дыхательного контроля и близкие к теоретически возможным величины ADP/O при окислении субстратов цикла Кребса и добавленного NADH. В дыхательной цепи клеток обоих типов функционировали все три пункта энергетического сопряжения. Окисление всех исследованных субстратов митохондриями из клеток дикого типа и мутанта протекало с участием двух альтернативных терминальных систем окисления. Степень участия альтернативной оксидазы в окислении субстратов возрастала при переходе клеток к стационарной фазе роста, однако в митохондриях из клеток мутанта уровень цианидрезистентного дыхания (не сопряженного с фосфорилированием) был ниже, чем в митохондриях из клеток дикого типа. Окисление NAD-зависимых субстратов митохондриями из клеток двух вариантов протекало с участием ротенон-чувствительного и ротенон-нечувствительного путей, уровень ротенон-нечувствительного дыхания в митохондриях мутанта был ниже, чем в митохондриях из клеток дикого типа. Предполагается, что меньшая вовлеченность альтернативных (нефосфорилирующих) путей окисления в общее дыхание у мутанта может частично объяснить увеличенное содержание ATP в его клетках. Однако отсутствие принципиальных различий в структуре дыхательной цепи митохондрий дикого типа и мутанта позволяет заключить, что увеличенное содержание ATP в клетках мутанта nap определяется главным образом его сниженными затратами на транспортные процессы.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: