Подавление программируемой смерти внутриклеточным cAMP не связано с экспрессией генов, кодирующих ингибитор апоптоза

Аннотация

Увеличение внутриклеточного содержания cAMP сопровождается экспрессией генов, промотор которых содержит Ca²⁺-cAMP регуляторный элемент. В гладкомышечных клетках сосудов (ГМК) апоптоз, вызванный устранением ростовых факторов, предотвращается при активации cAMP-зависимой сигнальной системы. В настоящей работе мы исследовали роль экспрессии генов в ингибировании апоптоза cAMP. В ГМК, трансфецированных E1A-аденовирусом, 6 ч инкубация в отсутствие сыворотки приводила к 20-кратному приросту содержания фрагментов хроматина и 10-кратному увеличению активности каспазы-3, использованных в качестве маркеров апоптоза. Активация аденилатциклазы форсколином сопровождалась 50% увеличением синтеза РНК и полностью подавляла развитие апоптоза в течение первых 6 ч после устранения ростовых факторов. Медленное развитие апоптоза было отмечено в клетках, обработанных форсколином после 6-ч инкубации. Через 24 ч содержание фрагментов хроматина было снижено по отношению к контрольным клеткам в 2 раза. Добавление актиномицина D и циклогексамида полностью блокировало синтез РНК и снижало синтез белка на 80%. Оба соединения не влияли на развитие апоптоза и его ингибирование форсколином. Более 70 вновь фосфорилированных белков было идентифицировано с помощью двумерного электрофореза в ГМК после их 3-ч инкубации с форсколином; после 24-ч количество фосфобелков снижалось в 2–3 раза. Полученные данные свидетельствуют, что подавление апоптоза в ГМК при активации cAMP-зависимой сигнальной системы опосредовано посттрансляционной модификацией предсуществующих компонентов апоптотической машинерии, а не синтезом ингибиторов апоптоза de novo.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: