Активация SoxRS-регулона в Escherichia coli оксидом азота и его физиологическими донорами

Аннотация

Изучен процесс индукции SoxRS-репарационного ответа в Escherichia coli оксидом азота (NO) и его физиологическими донорами – S-нитрозоглутатионом (GS-NO) и динитрозильными комплексами железа с глутатионовыми (ДНКЖ_глу) и цистеиновыми (ДНКЖ_цис) лигандами. Для детализации молекулярных механизмов трансдукции сигнала посредством нитрозилирования Fe-S-центров SoxR-белка проведено сравнение способности чистого NO и NO-доноров активировать SoxRS-регулон в клетках E. coli со слитым soxS :: lacZ-опероном. Для контроля за формированием индуцированных комплексов белок–ДНКЖ использован метод ЭПР-спектроскопии. Нами зарегистрированы практически одинаковые уровни экспрессии гена soxS под действием ДНКЖ_цис, NO и GS-NO, в то время как ДНКЖ_глу был значительно менее эффективен. Таким образом, более низкая стабильность ДНКЖ_цис in vitro контрастировала с его более высокой биологической активностью. Предобработка клеток хелатором железа – о-фенантролином – подавляла экспрессию soxS-гена GS-NO. Обработка интактных клеток E. coli ДНКЖ, GS-NO и NO в эквимолярной концентрации 150 мкМ способствовала формированию единственного ЭПР-определяемого сигнала ДНКЖ-типа с g = 2,03. Мы предполагаем, что начальный этап в транскрипционной активности белка SoxR является двухстадийным. На первой стадии формируются ДНКЖ-«затравки» из экзогенного NO и свободного железа и затем именно эти ДНКЖ приводят к дезинтеграции [2Fe-2S]-кластеров в белке SoxR и к последующей активации транскрипции всего SoxRS-регулона.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: