БИОХИМИЯ, 2001, том 66, вып. 9, с. 1165–1171
УДК 577.123
Получение, кристаллизация и исследование комплексов рибосомного белка S8 со специфическими фрагментами рРНК архейного и бактериального происхождения*
1 Институт белка РАН
2 Institute of Medical Chemistry and Biochemistry, Innsbruck University
3 Institute of Molecular and Cellular Biology, Strasbourg, France
Поступила в редакцию 14.05.2001
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: рибосомный белок S8, рРНК-белковый комплекс, константа диссоциации, Thermus thermophilus, Methanococcus jannaschii.
Аннотация
Сердцевинный рибосомный белок S8 независимо от других белков связывается с центральным доменом 16S рРНК и требуется для сборки 30S субчастицы. На рибосомах Escherichia coli было показано, что для специфического и прочного связывания белка S8 достаточен фрагмент рРНК, ограниченный нуклеотидами: 588–602/636–651. В настоящей работе исследовались комплексы рибосомного белка S8 из Thermus thermophilus и Methanococcus jannaschii с короткими фрагментами рРНК из тех же организмов. Измерены константы диссоциации комплексов белка S8 с полученными фрагментами РНК. На основе экспериментов по связыванию сконструированы фрагменты рРНК разной длины и синтезированы в препаративных количествах в системе in vitro c T7 РНК-полимеразой. Стабильные S8–РНК-комплексы использовались для кристаллизации. Закристаллизованы как гомологические бактериальные и архейные комплексы, так и гибридные комплексы между архейным белком и бактериальной рРНК. Пригодные для рентгеноструктурного анализа кристаллы были получены для комплекса белка S8 из M. jannaschii с фрагментом рРНК длиной 37 нуклеотидов из того же организма.
Текст статьи
Сноски
* Ускоренная публикация.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.