БИОХИМИЯ, 2001, том 66, вып. 8, с. 1066–1077
УДК 577.152.3
Фосфорилирование α‑субъединицы Na,K‑ATPазы из солевых желез уток под действием cAMP-зависимой протеинкиназы ингибирует активность фермента
1 Кафедра биохимии биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
2 Кафедра биоорганической химии биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
3 Отдел биологии и Отдел химии Карлетонского университета
Поступила в редакцию 14.11.2000
После доработки 09.12.2000
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Na,K-ATPаза, cAMP-зависимая протеинкиназа, фосфорилирование, фосфосерин, детергенты.
Аннотация
Ранее было установлено, что хотя фосфорилирование Na,K-ATPазы cAMP-зависимой протеинкиназой (ПКА) происходит в интактных клетках, in vitro очищенный фермент фосфорилируется ПКА только после его обработки детергентом, что сопровождается нежелательным побочным влиянием детергента в виде полной инактивации Na,K-ATPазы. Для выявления эффекта фосфорилирования Na,K-ATPазы под действием ПКА на активность фермента in vitro проведено сравнительное исследование влияния различных детергентов и лигандов на стехиометрию фосфорилирования и активность Na,K-ATPазы из солевых желез уток (изофермент α1β1-типа). Показано, что Chaps вызывает минимальное ингибирование Na,K-ATPазы. В присутствии 0,4% Chaps при соотношении белок/детергент 1/10, в среде, содержащей 100 мМ KCl и 0,3 мМ ATP, ПКА фосфорилирует Na,K-ATPазу по остатку(ам) серина с максимальным значением стехиометрии 0,6 моль Pi/моль α-субъединицы. Фосфорилирование Na,K-ATPазы под действием ПКА в присутствии детергента приводит к ингибированию Na,K-ATPазы, при этом наблюдается строгая корреляция между включением Pi в α-субъединицу и падением ферментативной активности Na,K-ATPазы.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.