Вариабельность действия инсулина на респираторный взрыв в нейтрофилах. Роль тирозиновых киназ и фосфатаз

1 Институт биофизики клетки РАН

2 Пущинский государственный университет

3 Институт инженерной иммунологии РАО «Биопрепарат» Министерства здравоохранения России

Поступила в редакцию 06.03.2000
После доработки 14.03.2001

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: нейтрофилы, инсулин, респираторный взрыв, праймирование, тирозиновые киназы, фосфатазы, хемилюминесценция, радиоизотопы.

Аннотация

В работе исследованы праймирующее действие инсулина на респираторный взрыв нейтрофилов, вызванный N-формил-метионил-лейцил-фенилаланином (ФМЛФ), и роль тирозиновых киназ и фосфатаз в этом процессе. Перитонеальные вызванные нейтрофилы мышей линии NMRI инкубировали с 0,01–100 нМ инсулином в течение 1–60 мин при температурах 22, 30 или 37°, затем активировали 0,1–50 мкМ ФМЛФ. Продукцию активных форм кислорода (АФК) регистрировали методом люминол-зависимой хемилюминесценции. Радиоизотопным методом по вытеснению ¹²⁵I-меченого инсулина показано, что связывание инсулина нейтрофилами мыши происходит с насыщением и с высокой степенью сродства. Действие инсулина не изменяло базальный уровень продукции АФК нейтрофилами, но могло приводить к модуляции ответа на ФМЛФ. Эффект праймирования зависел от температуры и времени преинкубации с инсулином, сочетаний концентраций инсулина и ФМЛФ. Блокатор тирозиновых киназ тирфостин 51 значительно уменьшал ответ на ФМЛФ. Инсулин не оказывал действия на клетки, предварительно обработанные тирфостином. Однако эффект тирфостина значительно уменьшался при активации 50 мкМ ФМЛФ нейтрофилов, предварительно обработанных инсулином. Этого не происходило при активации ФМЛФ в концентрации 5 мкМ, при которой не наблюдалось праймирующего действия инсулина. Инсулин не усиливал эффекта при применении после блокаторов фосфатаз ортофосфата и пирофосфата, при подаче блокаторов после инсулина действие веществ было близким к аддитивному. Вероятно, праймирование инсулином вызванного ФМЛФ респираторного взрыва запускается тирозиновым фосфорилированием и реализуется при его участии и участии путей сигнализации, запускаемых с участием тирозинового фосфорилирования, но впоследствии независимых от него. Вклад протеинфосфатаз в праймирование респираторного взрыва нейтрофилов инсулином незначителен. Полученный результат косвенно подтверждает предположение о том, что праймирование респираторного взрыва нейтрофилов является результатом перекрестного взаимодействия сигнальных путей рецепторов ФМЛФ и инсулина, происходящего с участием тирозинового фосфорилирования.

Текст статьи

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.