Метод поляризации флуоресценции в исследовании различных форм ангиотензин-превращающего фермента

Аннотация

Метод поляризации флуоресценции применен для изучения взаимодействия трех форм ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) быка с конкурентным пептидным ингибитором лизиноприлом, в состав которого введена флуоресцентная метка. Константы диссоциации K_d фермент-ингибиторных комплексов в 50 мM Hepes-буфере, pH 7,5, содержавшем 150 мM NaCl, 1 мкM ZnCl₂, при 37° составили (2,3 ± 0,4) · 10^–8, (2,1 ± 0,3) · 10^–8 и (2,1 ± 0,2) · 10^–8 M для двудоменного соматического АПФ, однодоменного тестикулярного АПФ и N-домена фермента соответственно. Взаимодействие фермента с ингибитором сильно зависело от присутствия в среде хлорид-анионов, кажущаяся константа диссоциации комплекса АПФ − хлорид, оцененная для соматической формы фермента, составила (1,3 ± 0,2) · 10^–3 M. Кинетика распада комплекса соматического АПФ с ингибитором не удовлетворяла условиям реакции первого порядка, а аппроксимировалась моделью параллельного распада двух популяций комплексов с константами скорости распада 0,13 ± 0,01 и 0,026 ± 0,001 c^–1, концентрации которых практически одинаковы. Кинетика распада комплексов однодоменных форм АПФ с ингибитором удовлетворяла условиям реакции первого порядка, причем константы скорости распада оказались близки по своему значению и составили 0,055 ± 0,001 для N-домена и 0,041 ± 0,001 с^–1 для тестикулярного АПФ.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: