Выделение, очистка и характеристика каталазы метилотрофных дрожжей Pichia pastoris

Аннотация

Из метилотрофных дрожжей Pichia pastoris выделена и очищена в 90 раз методами ионообменной хроматографии и гель-фильтрации каталаза (КАТ_рр) с молекулярной массой 223 кДа. Получены количественные параметры спектров поглощения и КД растворов КАТ_рр и ее концентрированной на мембранах формы (КАТ_рр-конц). При 30° в 10 мМ фосфатном буфере, pH 7,4, измерены скорости разложения H₂O₂ и определены кинетические характеристики КАТ_рр и КАТ_рр-конц – K_m и k_кат, а также эффективная константа скорости инактивации ферментов в ходе каталитического процесса k_ин и константа скорости взаимодействия Комплекса I каталаз с H₂O₂ k₂. При 45° изучена термоинактивация КАТ_рр в растворах, охарактеризованная эффективной константой скорости k_ин*, а при 20° инактивация КАТ_рр низкочастотным ультразвуком (27 кГц), охарактеризованная константой скорости первого порядка k_ин(УЗ). Все спектральные и кинетические характеристики КАТ_рр и КАТ_рр-конц сравнены с их значениями для каталазы печени быка (КАТ) и каталазы из метилотрофных дрожжей Candida boidinii (КАТ_св). По спектральным свойствам все три каталазы во многом аналогичны, но значительно различаются своими кинетическими параметрами, из сопоставления которых следует, что лучшим ферментом по совокупности всех свойств является КАТрр, обнаружившая максимальную эффективность в терминах k_кат/K_m, сравнимую с КАТ термостабильность в терминах k_ин*, минимальную k_ин и высокую стабильность в поле ультразвуковой кавитации при мощности УЗ 60 Вт/см².

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: