Роль двух консервативных аминокислотных остатков в функционировании фактора транскрипции DREB1A

Аннотация

Транскрипционные факторы подгруппы DREBP и подгруппы EREBP содержат консервативные ДНК-связывающие домены, называемые AP2/EREBP, которые специфически узнают cis-элемент DRE и GCC-бокс соответственно. Аминокислотные остатки доменов AP2/EREBP в положениях 14 и 19 абсолютно консервативны у транскрипционных факторов как подгруппы DREBP, так и подгруппы EREBP. Однако эти два аминокислотных остатка у транскрипционных факторов подгрупп DREBP и EREBP различаются. Чтобы оценить функциональную значимость обоих остатков в специфическом связывании с ДНК, Val (в положении 14) и Glu (в положении 19) в домене AP2/EREBP фактора DREB1A, относящегося к подгруппе DREBP, были мутационно заменены по отдельности или одновременно на Ala и Asp соответственно. Ala и Asp – консервативные остатки, характерные для транскрипционных факторов подгруппы EREBP. Анализ, проведенный на дрожжах in vivo, выявил следующие факты: 1) в экспериментах по трансформации клеток дрожжей, несущих два гена-репортера HIS и lacZ, с использованием селективной среды SD/His^–Ura^–Trp^– + 30 мM ~60 мM 3-AT рост клеток был нормальным после трансформации плазмидным вектором, содержащим DREB1A с единичной мутацией в положении 19, заметно подавлен в результате трансформации с DREB1A с единичной заменой в положении 14 и резко подавлен в случае использования DREB1A с двойной мутацией 14/19; 2) количественное определение активности β-галактозидазы выявило, что уровни экспрессии гена lacZ снижены у клеток, трансформированных векторами с одинарной мутацией DREBA1 в положении 14 и с двойной мутацией 14/19. Результаты проведенных экспериментов показали, что мутация в положении 19 не влияет на способность транскрипционного фактора DREB1A к связыванию с DRE cis-элементом; мутация в положении 14 достоверно снижает способность к связыванию, тогда как двойная мутация 14/19 резко подавляет ее. Эти данные указывают на то, что оба консервативных аминокислотных остатка Val (14) и Glu (19) играют ключевую роль в регуляции процесса связывания DREB1A c cis-элементом DRE.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: