Взаимодействие ДНК-полимеразы δ вьюна с дуплексами ДНК, содержащими однонитевые бреши

Аннотация

Изучалось взаимодействие ДНК-полимеразы δ, очищенной из икры костистой рыбы Misgurnus fossilis (вьюн), с дуплексами ДНК, содержащими однонитевые бреши размером 1–13 н.о. На однонитевых матрицах в отсутствие цепи ДНК, ограничивающей матричный участок, фермент осуществлял дистрибутивную элонгацию затравок. Однако в присутствии проксимального 5′-концевого фрагмента, ограничивающего доступную матрицу, активность фермента существенно возрастала, и он был способен заполнять бреши размером 5–9 н.о. процессивным образом. Эти результаты свидетельствуют о том, что ДНК-полимераза δ может одновременно взаимодействовать с 3′- и 5′-концевыми участками нитей, ограничивающих короткую брешь в дуплексе ДНК. Предположение о взаимодействии ДНК-полимеразы δ с проксимальным 5′-концевым участком, ограничивающим короткую брешь, подтверждено методом задержки в геле при анализе комплексов фермента с различными ДНК-субстратами. ДНК-полимераза δ обладала существенно более высоким сродством к дуплексам, содержащим бреши размером около 10 н.о., по сравнению с обычными праймерматричными комплексами. Наибольшее сродство фермент обнаружил к ДНК-субстратам с неспаренными 3′-концевыми участками в праймерах. Совокупность полученных результатов предполагает высокую активность ДНК-полимеразы δ в клеточном ядре на репаративных интермедиатах ДНК, содержащих однонитевые бреши и неспаренные 3′-концевые фрагменты.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: