БИОХИМИЯ, 2001, том 66, вып. 1, с. 105–113
УДК 577.152.344
Бактериальная протеиназа ECP32, специфически расщепляющая актин, и ее воздействие на цитоскелет in vivo
Институт цитологии Российской академии наук
Поступила в редакцию 19.04.2000
После доработки 28.06.2000
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: протеиназа ECP32, очистка белков, ограниченный протеолиз актина, актин, антитела, микроинъекция, амебоидное движение.
Аннотация
Разработан препаративный метод выделения бактериальной протеиназы ECP32, позволяющий получить 100 мкг фермента из 10 л культуральной жидкости Escherichia coli A2. Метод включает хроматографию, ультрафильтрацию и ПААГ-электрофорез в неденатурирующих условиях. Очищенный препарат содержит ~80% ECP32 и не обладает ATPазной активностью. Получены поликлональные антитела к ECP32 и предложен метод двухступенчатого выделения протеиназы с использованием аффинной хроматографии на их основе. Микроинъекция очищенного препарата ECP32 в клетки Amoeba proteus вызывала обратимые нарушения в двигательной активности амеб. Эффект не наблюдался при ингибировании специфической активности протеиназы антителами к ECP32. Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования бактериальной протеиназы ECP32 для изучения функций актина in vivo.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.