Влияние ионов цинка на конформационную стабильность дрожжевой алкогольдегидрогеназы

Аннотация

Получены препараты дрожжевой алкогольдегидрогеназы, в которых удален конформационный ион цинка (апо-I АДГ) или оба (конформационный и каталитический) иона цинка (апо-II АДГ). Денатурация апо-I АДГ и апо-II АДГ под действием мочевины изучена с использованием методов флуоресценции, КД и второй производной спектров поглощения. По сравнению с нативным ферментом апо-I АДГ проявляет меньшую степень разворачивания белковой структуры и меньшую стабильность при денатурации мочевиной. В то же время для апо-II АДГ степень разворачивания существенно выше, однако для этой формы фермента даже при высоких концентрациях мочевины обнаруживается остаточная упорядоченная структура. Полученные результаты свидетельствуют о том, что конформация нативной АДГ более устойчива к денатурирующему воздействию мочевины, чем конформация апо-I АДГ, и, следовательно, конформационный ион цинка играет важную роль в стабилизации молекулы АДГ. На основании того факта, что константы скорости разворачивания и инактивации для нативной дрожжевой АДГ и апо-I АДГ одинаковы, сделано заключение, что разворачивание в области конформационного иона цинка не является скоростьлимитирующей стадией в процессе разворачивания молекулы АДГ. Предполагается, что каталитический ион цинка более существен для поддержания структуры АДГ. АДГ теряет способность к кооперативному разворачиванию после удаления атомов цинка. Форма кривых разворачивания апо-I АДГ указывает на существование промежуточной формы. Как для нативной дрожжевой АДГ, так и для апо-I АДГ инактивация происходит при более низких концентрациях мочевины по сравнению с теми, которые вызывают существенные конформационные изменения молекулы фермента. При концентрациях мочевины выше 4 М константы скорости инактивации заметно превышают константы скорости для быстрой фазы процесса разворачивания. Эти результаты согласуются с концепцией гибкости активного центра ферментов, развиваемой Ч.-Л. Цоу.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: