Сравнительное исследование экспрессии мРНК индуцибельной NO-синтазы в клетках сосудов различных организмов

Аннотация

Цель работы состояла в исследовании индукции экспрессии мРНК индуцибельной формы NO-синтазы (iNOS) в культивируемых клетках сосудов различных организмов. Для этого изучали уровень экспрессии гена iNOS и механизмы регуляции экспрессии в эндотелиальных и гладкомышечных клетках (ГМК) сосудов крысы, кролика, быка и человека методом Нозерн-блоттинга, хлорамфениколацетилтрансферазным методом (CAT) и методом регистрации изменения электрофоретической подвижности (EMSA). Количественное определение мРНК iNOS Нозерн-блоттингом показало, что комбинация интерлейкина-1β (IL-1β), фактора некроза опухолей-α (TNF-α) и липополисахарида (ЛПС) значительно повышает экспрессию iNOS в ГМК человека и крысы, а в случае эндотелиальных клеток эффект выражен в меньшей степени. Эффект IL-1β значительно слабее, чем активация под действием комбинации всех трех факторов. IL-1β или комбинация IL-1β, TNF-α и ЛПС не оказывали заметного влияния на экспрессию мРНК iNOS в клетках эндотелия или в ГМК сосудов быка и кролика. Результаты по определению уровня экспрессии репортерного гена CAT-методом соответствуют данным, полученным методом Нозерн-блоттинга, так как активность САТ была повышена в 7 раз при обработке ГМК под действием комбинации всех трех факторов, а в случае эндотелиальных клеток сигнал повышался в 2 раза. Эффект IL-1β на ГМК сосудов крысы и человека был не очень большим (повышение САТ в 2 раза). Данные EMSA указывают на появление двух полос с измененной электрофоретической подвижностью в эндотелиальных клетках сосудов крысы и человека, связывающихся с участками от –1037 до –787 гена iNOS крысы, а в аналогичных условиях в ГМК наблюдалось появление только одной полосы ядерных белков. Полученные результаты указывают на существование специфических механизмов индукции экспрессии iNOS, характерных для определенных клеток и организмов.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: