БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 11, с. 1570–1582
УДК 577.152.344
Продукция растворимого P-селектина тромбоцитами и эндотелиальными клетками
Поступила в редакцию 05.04.1999
После доработки 03.06.1999
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Р-селектин, тромбоциты, эндотелиальные клетки, иммуноферментный анализ.
Аннотация
Исследовали распределение растворимой формы белка клеточной адгезии Р-селектина в тромбоцитах и культивируемых эндотелиальных клетках человека, а также его содержание в плазме крови здоровых доноров и больных с различным содержанием тромбоцитов. Р-Селектин измеряли с помощью иммуноферментного метода в лизате тромбоцитов и эндотелиальных клеток, полученном после их обработки тритоном Х-100 (общий Р-селектин), супернатанте, полученном после разрушения клеток и осаждения мембранной фракции (растворимый внутриклеточный Р-селектин), а также в супернатанте целых активированных и неактивированных тромбоцитов и в среде культивирования эндотелиальных клеток. Показано, что ~10% общего Р-селектина тромбоцитов составляет растворимая форма белка, которая не соосаждается вместе с мембранной фракцией. Активация тромбоцитов тромбином, ADP и аналогом тромбоксана А2 сопровождается секрецией 30-50% растворимого внутриклеточного Р-селектина. Измерения Р-селектина в культуре эндотелиальных клеток показали, что эндотелий аорты человека содержит в ~2 раза больше Р-селектина на 1 мг белка, чем эндотелий пупочной вены. Установлено, что культивируемые эндотелиальные клетки содержат внутриклеточный, не ассоциированный с мембранами, растворимый Р-селектин (~10% общего Р-селектина). Растворимый Р-селектин был также идентифицирован в культуральной среде эндотелиальных клеток, где его количество коррелировало с общим содержанием в клетках. Обнаружена высокодостоверная корреляция между содержанием Р-селектина в плазме и содержанием тромбоцитов в крови доноров и больных с тромбоцитозом и тромбоцитопенией. Эти данные указывают на то, что тромбоциты являются одним из источников Р-селектина плазмы. Однако присутствие Р-селектина в плазме больных с глубокой тромбоцитопенией свидетельствует о том, что эндотелиальные клетки также могут участвовать в продукции плазменного Р-селектина. Таким образом, эксперименты in vitro и измерения плазменного Р-селектина показали, что его источником могут быть как тромбоциты, так и эндотелиальные клетки. Было обнаружено, что растворимый Р-селектин тромбоцитов и плазмы реагирует с антителами против цитоплазматического домена Р-селектина. Эти данные свидетельствуют о том, что по крайней мере часть растворимого Р-селектина является продуктом синтеза с использованием специальной мРНК, не содержащей последовательности, кодирующей трансмембранный домен белка, а не продуктом протеолитического отщепления экстрацеллюлярного участка мембранной формы белка.