БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 11, с. 1563–1569
УДК 577.391; 547.963.3
Определение поврежденности и репараций ДНК тканей γ-облученных животных методом полимеразной цепной реакции
Поступила в редакцию 23.03.1999
После доработки 20.05.1999
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: повреждения ДНК, геноспецифическая репарация, полимеразная цепная реакция, γ-облучение.
Аннотация
Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на фрагментах генов оценивали поврежденность и репарацию ДНК, выделенной из мозга и селезенки γ-облученных крыс. Показано, что повреждения, возникающие в ДНК тканей γ-облученных животных, способны блокировать ПЦР с Tth-полимеразой. Ингибирование регистрируется по снижению уровня амплификации фрагментов транскрибируемого (β-актина), γ-индуцибельного (р53) и не транскрибируемого (IgE, тяжелая цепь) генов. Наибольшее снижение уровня амплификации фрагментов генов наблюдалось на ДНК-матрице, выделенной из тканей крыс сразу после их γ-облучения. На ДНК, выделенной из тканей облученных крыс по истечении 0,5-5,0 ч пострадиационного времени, наблюдалось восстановление уровня амплификации независимо от транскрипционной активности этих генов. Для сравнительной оценки ингибирования ПЦР на γ-облученной in vitro ДНК использованы и образцы ДНК-матриц, содержащие УФ-повреждения, 8-окси-2′-дезоксигуанозина (8-O-dG) и апуринизированные участки (АП-сайты). Показано, что γ- и УФ-облученная ДНК, а также ДНК с АП-сайтами вызывает ингибирование ПЦР, тогда как 8-O-dG не влияет на уровень ПЦР-амплификации фрагмента гена. Наблюдаемые изменения уровней ПЦР-амплификации генов на ДНК-матрице, полученной из тканей облученных животных, обусловлены содержанием различных повреждений в ДНК, способных блокировать Tth-полимеразу. Результаты исследований показывают, что метод ПЦР может быть эффективно использован для оценки интегральной поврежденности и репарации ДНК в клетках тканей облученных животных.