БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 11, с. 1536–1543
УДК 577.212.3
Термостабильная ДНК-полимераза из Thermus thermophilus B35: клонирование, определение первичной структуры и экспрессия гена
Поступила в редакцию 11.01.1999
После доработки 17.05.1999
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: термостабильная ДНК-полимераза, амплификация, клонирование гена, секвенирование, экспрессия гена.
Аннотация
Проведен анализ первичной структуры генов ряда термостабильных ДНК-полимераз (Taq, Tth и Tfl) и выявлены консервативные области, характерные для данного семейства полимераз. С помощью праймеров к одному из консервативных участков был амплифицирован фрагмент ДНК обнаруженного нами ранее штамма Thermus thermophilus В35. Полученный фрагмент клонировали в плазмидном векторе и использовали в качестве «зонда» для гибридизации с фрагментами ДНК Thermus thermophilus В35, расщепленной различными эндонуклеазами рестрикции. Рестрикционный фрагмент ДНК, несущий полноразмерный ген Tte-пол, был обнаружен, клонирован и секвенирован. Проведен сравнительный анализ первичных структур генов ДНК-полимераз Tte и Tth. Ген ДНК-полимеразы Tie был переклонирован в экспрессирующий вектор и из полученного штамма-продуцента выделен рекомбинантный белок. Изучены свойства Tte-пол в полимеразной цепной реакции.