БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 11, с. 1499–1506
УДК 577.112
Структура и фолдинг продукта гена 9 бактериофага Т4, контролирующего процесс инфицирования. I. Получение и свойства рекомбинантного белка
Поступила в редакцию 15.07.1999
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: бактериофаг Т4, продукт гена 9, вектор экспрессии.
Аннотация
Продукт гена 9 (пг9,288 аминокислотных остатков на мономер, молекулярная масса 30,7 кДа) бактериофага Т4 контролирует реорганизацию базальной пластинки и сокращение чехла после взаимодействия длинных хвостовых фибрилл вируса с рецепторами бактериальной клетки. В настоящей работе мы получили рекомбинантный белок и выяснили, что пг9 является стабильным тримером и активен в системе комплементации in vitro, достраивая дефектные частицы фага, не содержащие пг9. По данным КД-спектроскопии полипептидная цепь пг9 содержит 65-73% β-структуры и 11-16% α-спиральных участков, что хорошо согласуется с предсказаниями вторичной структуры по последовательности белка. Дополнительно мы сконструировали серию плазмидных векторов, экспрессирующих делеционные мутанты пг9. Фрагменты с протяженными делениями N-концевого участка молекулы, как и полноразмерный белок, являются тримерами, устойчивыми к Ds-Na, и снижают формирование инфекционных частиц фага в системе комплементации in vitro нативным пг9. Делеция в С-концевой области молекулы приводит к нарушению тримеризации и снижению стабильности белка.