БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 10, с. 1348–1356
УДК 577,27
Трехсайтный сэндвич-метод определения миоглобина может быть более эффективным, чем двухсайтный
Поступила в редакцию 04.02.1999
После доработки 08.04.1999
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: миоглобин, моноклональные антитела, сэндвич-метод, трехсайтный сэндвич-метод.
Аннотация
Описывается иммуноферментиый сэндвич-метод определения миоглобина человека с использованием трех моноклональных антител к различным эпитопам белка. Смесь антител клонов 13G6 и 18Н2 адсорбировалась на твердой фазе, а антитела клона 14D6 метились пероксидазой хрена. Показано, что в сэндвич-методе определения миоглобина адсорбция на твердой фазе смеси двух антител к разным эпитопам миоглобина с мечеными антителами к третьему эпитопу дает существенный (4 6-кратный) выигрыш в чувствительности анализа в сравнении с вариантами двухсайтного метода с использованием индивидуальных улавливающих антител (13G6 или 18H2), Разрешение метода (изменение цветного окрашивания на единицу изменения концентрации миоглобина) также возрастает. Увеличение чувствительности, по-видимому, связано с тем, что часть молекул миоглобина связывается одновременно с двумя молекулами антител, которые адсорбированы на твердой фазе. При этом образуется стабильный комплекс: [адсорбированное антитело 1-миоглобинадcорбированное антитело 2]. Предполагается, что обнаруженный эффект является универсальным для антигенов белковой природы. Описанный вариант сэндвич-метода предложено называть трехсайтным.