БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 9, с. 1280–1290
УДК 577.175.5
Сравнительная структурно-функциональная характеристика рекомбинантного и природного адренодоксина.взаимодействие с цитохромом P-450scc
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: адренодоксин, цитохром P-450scc, гетерологическая экспрессия, белок-белковые взаимодействия, конформационная подвижность.
Аннотация
Оптимизированы условия гетерологической экспрессии в клетках Е. coli рекомбинантного адренодоксина быка (уровень экспрессии 12—14 мкмоль на 1 л культуры). Предложена высокоэффективная схема очистки рекомбинантного белка, осуществлена его структурно-функциональная характеристика в сравнении с природным адренодоксином, выделенным из митохондрий коры надпочечников. Показано, что в отличие от природного ферредоксина, которому присуща микрогетерогенность, рекомбинантный адренодоксин гомогенен по данным N- и С-концевого анализа, его аминокислотная последовательность соответствует последовательности полноразмерного зрелого адренодоксина, включающей 128 аминокислотных остатков, Исследовано взаимодействие природного и рекомбинантного адренодоксина с цитохромом P-450scc. Определены эффективность ферментативного восстановления цитохрома P-450scc в реконструированной системе, сорбционная емкость аффинных адсорбентов на основе природного и рекомбинантного адренодоксина, спектральный ответ и изменения усредненной полярности тирозиновых остатков твин-индуцированной низкоспиновой формы цитохрома P-450scc при образовании комплекса с адренодоксином в различных уеловиях. Показано, что рекомбинантный адренодоксин функционально активен и в восстановленном состоянии, а также при снижении ионной силы буферного раствора проявляет несколько большее, чем природный белок, сродство к цитохрому P-450scc. Обсуждается возможность участия С-концевого фрагмента молекулы адренодоксина во взаимодействии с цитохромом P-450scc, а также преимущества замены в экспериментальной работе природного белка рекомбинантным.