БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 9, с. 1204–1213
УДК 577.152.3
Увеличение сродства к целлюлозе целлобиогидролазы I и ее каталитического домена в присутствии продукта реакции — целлобиозы
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Trichoderma reesei, целлобиогидролаза I, каталитический домен, МУФ-целлоолигосахариды, титрование, целлюлоза, сродство, целлобиоза.
Аннотация
Каталитический домен целлобиогидролазы I Trichoderma reesei получен путем обработки папаином нативного фермента, адсорбированного на поверхности микрокристаллической целлюлозы. Интактный фермент и его каталитический домен имели близкие удельные активности при действии на флуорогенные производные целлоби- – целлопентаозы, причем наибольшая скорость образования флуорофора отмечена для производного целлопентаозы, а наименьшая – для производного тетраозы. При титровании фермента и его каталитического домена метилумбеллиферил-целлотетраозой получены значения молекулярных масс соответственно 49 и 39 кДа, а константы диссоциации фермент-лигандных комплексов – соответственно 65 и 70 нМ (20°). При этом интактный фермент и каталитический домен существенно более сильно (в 50-60 раз) различались по сродству к микрокристаллической целлюлозе в условиях низких соотношений Е/S (до 10 мг/г). Оцененные значения констант десорбции составляли в этих условиях соответственно 10 и 500 нМ. Продукт и ингибитор реакции – целлобиоза (Ki = 10 мкМ) в концентрации 10 мМ не ослабляла, как ожидалось, а, напротив, усиливала в этих условиях сродство нативного фермента и его каталитического домена к нерастворимому субстрату в 3-4 раза.