БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 9, с. 1185–1191
УДК 577.152.3
Субклеточная локализация и свойства ферментов глиоксилатного цикла в печени крыс с аллоксановым диабетом
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: глиоксилатный цикл, аллоксановый диабет, изоцитратлиаза, малатсинтаза, малатдегидрогеназа, субклеточная локализация, кинетические характеристики.
Аннотация
Ключевые ферменты глиоксилатного цикла – изоцитратлиаза и малатсинтаза – обнаружены в печени и почках крыс с аллоксановым диабетом. Активность этих ферментов в печени составляет 0,080 и 0,0430 ФЕ на 1 мг белка соответственно. В почках активность изоцитратлиазы равняется 0,030 ФЕ на 1 мг белка, а малатсинтазы — 0,018 ФЕ на 1 мг белка. Показана пероксисомальная локализация ферментов глиоксилатного цикла. Установлено появление новой изоформы малатдегидрогеназы в клетках печени крыс с аллоксановым диабетом. Для выделения изоцитратлиазы были использованы фракционирование сульфатом аммония и хроматография на ДЭАЭ-Toyopearl. В результате был получен ферментный препарат с удельной активностью 6,1 ФЕ на 1 мг белка, что сортветствует 76,25-кратной степени очистки и выходу фермента 32,6%. Изучение каталитических характеристик изоцитратлиазы показало, что фермент подчиняется кинетике Михаэлиса-Ментен (Кт по изоцитрату 0,08 мМ), конкурентно ингибируется глюкозо-1-фосфатом (Кi = 1,25 мМ), сукцинатом (Кi – 1,75 мМ), цитратом (Кi = 1,0 мМ); pH-оптимум данного фермента в Tris-HCI-буфере, 7,5.