БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 7, с. 941–948
УДК 577.218
Усиливающее действие кальциевых ионофоров на вызываемый форболовым эфиром респираторный взрыв в перитонеальных нейтрофилах мыши
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: нейтрофил, Са2+-ионофоры, праймирование, активация, респираторный взрыв, арахидоновая кислота, транспорт кальция.
Аннотация
В работе представлены данные и сравнительный анализ способности трех кальциевых ионофоров (А23187, 4-бром-А23187 и иономицина) модулировать, с одной стороны, респираторный взрыв нейтрофилов в ответ на действие форболового эфира, а с другой стороны, повышать концентрацию свободного внутриклеточного Са2+ ([Са2+]i). Продукция активных форм кислорода (АФК) оценивалась по люминолзависимой хемилюминесценции, [Ca2+]i измерялась с использованием флуоресцентного зонда Fura-2. Показано, что А23187 (0,05-2 мкМ) и иономицин (0,001-0,5 мкМ), но не 4-бром-А23187, увеличивали (в 3-4 раза) респираторный взрыв, индуцируемый форболовым эфиром. Зависимость интегрального ответа (суммарной продукции АФК за 6 мин) от концентрации иономицина и А23187 имела колоколообразную форму с нарастанием при малых и спадом при высоких концентрациях ионофоров. Максимальный эффект наблюдался в присутствии 0,5 мкМ иономицина и 2 мкМ А23187, которые вызывали временное повышение [Са2+]i до 1776 ± 197 и 955 ± 27 нМ соответственно. Эффект ионофоров отсутствовал в бескальциевой среде, хотя они повышали [Ca2+]i до ~400 нМ за счет мобилизации Са2+ из внутриклеточных запасов. В клетках с истощенными запасами Са2+ добавление 1,5 мМ Са2+ совместно с форболовым эфиром приводило к двукратному увеличению продукции АФК. Блокирование фосфолипазы А2 4-бромфенацилбромидом вызывало значительное снижение продукции АФК. Таким образом, вход Са2+ и образование арахидоновой кислоты под действием фосфолипазы А2 являются обязательными факторами для усиления ионофорами продукции АФК При активации клеток форболовыми эфирами.