БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 6, с. 843–852
УДК 577.112.8
Особенности взаимодействия мелиттина с мембранами саркоплазматического ретикулума
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: саркоплазматический ретикулум, Са-АТРаза, мелиттин, флуоресценция, ЭПР спектроскопия, сшивающие агенты.
Аннотация
Добавление амфипатического пептида из яда пчелы мелиттина к везикулам саркоплазматического ретикулума (СР) скелетных мышц кролика приводит к быстрому (в течение 1 мин) коротковолновому сдвигу максимума флуоресценции комплекса мелиттин-мембраны СР. В течение последующих 45 мин положение максимума не изменяется, однако интенсивность флуоресценции комплекса мелиттин-мембраны СР снижается на ~35% с константой скорости 0,14 мин-1. Внесение мелиттина в суспензию везикул СР вызывает быстрое исчезновение изотропного сигнала в ЭПР-спектре спин-меченой стеариновой кислоты, добавленной к мембранам ретикулума. Дальнейшее изменение параметров спектра связанного с мембранами зонда свидетельствует об увеличении микровязкости его микроокружения (эмпирический параметр Т/η снижается на ~35% с константой скорости 0,11 мин-1). Поверхностный потенциал мембран СР, измеренный с помощью pH-чувствительного красителя нейтрального красного, снижается при Добавлении мелиттина от -60 до -30 мВ. С использованием сшивающего агента о-фенантролина меди установлено, что мелиттин индуцирует медленную агрегацию белка Са-АТРазы в мембранах СР; содержание мономерной формы фермента убывает с константой скорости 0,14 мин-1. Делается вывод, что мелиттин быстро связывается с мембранами СР, индуцируя медленные изменения конформаций и олигомерного состояния Са-АТРазы, а также медленные структурные перестройки в липидном бислое мембран СР.