БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 6, с. 777–781
УДК 577.152.2
О биосинтезе пуринов de novo в сетчатке быка: очистка и характеристика амидофосфорибозилтрансферазы и фосфорибозилпирофосфат синтетазы
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: биосинтез пуринов De novo, сетчатка, амидофосфорибозилтрансфераза, фосфорибозилпирофосфат синтетаза.
Аннотация
Впервые продемонстрировано наличие биосинтеза пуринов de novo в сетчатке быка. Амидофосфорибозилтрансфераза (КФ 2.4.2.14) – фермент, определяющий скорость процесса, а также фосфорибозилпирофосфат синтетаза (КФ 2,7.6.1) – фермент, регулирующий внутриклеточную концентрацию фосфорибозилпирофосфата, очищены и охарактеризованы. Молекулярные массы субъединиц ферментов соответствовали данным, опубликованным для ферментов из ткани печени, и составляли: для амидофосфорибозилтрансферазы -порядка 50 кДа, для каталитических субъединиц фосфорибозилпирофосфат синтетазы – порядка 34 кДа,для ассоциированных с ней белков – 39 и 41 кДа. Измеренные значения кажущихся Кт для субстратов и косубстратов реакций соизмеримы с таковыми для ферментов, очищенных из печени, и составляют: для амидофосфорибозилтрансферазы – Кm_Gln,каж = 0,75 ± 0,05 мМ, Кm_PRPP,каж = 0,66 ± 0,09 мМ (соответствующие значения Vmax = 59 ± 3 нмоль PPi/мг белка ∙ мин для глутамина и Vmax – 136 ± 12 нмоль PPi/мг белка ∙ мин для PRPP),для PRPP синтетазы – Кm_Rib5P,каж = 37,9 ± 0,5 мкМ, Кm_АТР,каж = 53 ± 7 мкМ (соответствующие значения Vmax = 61 ±± 4 нмоль PRPP /мг белка ∙ мин для Rib-5-Р и Vmax = 52 ± 3 нмоль PRPP/мг белка ∙ мин для АТР). Чувствительность PRPP синтетазы сетчатки к ингибированию ADP существенно меньше, чем у фермента печени.