БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 5, с. 697–702
УДК 577.152.3
Сайт-специфическая эндонуклеаза из термофильного штамма Bacillus species F4
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: сайт-специфическая эндонуклеаза, изошизомер, термофильные бактерии.
Аннотация
В процессе скринирования термофильных бактерий, изолированных из почвы, выделен штамм-продуцент сайт-специфической эндонуклеазы BspF4 I. Эндонуклеаза рестрикции, не содержащая примесей неспецифических нуклеаз, была очищена с помощью колоночной хроматографии на оксиапатите, голубой агарозе и ДЭАЭ-трисакриле. Фермент стабилен при хранении и проявляет максимальную активность при 48-56° в присутствии альбумина в буфере, содержащем 10 мМ Tris-HCl, pH 7,5, 10 мМ MgCl2. BspF4 I узнает на ДНК последовательность 5′-GGNCC-3′ и является изомером, но не изошизомером эндонуклеазы Sau96 I. В от личие от прототипа он расщепляет сайт неоднозначно. Цепь, содержащая пурин в центре последовательности, расщепляется как и в случае прототипа после первого G, а цепь, содержащая пиримидин, – либо перед первым G, либо после первого G.