БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 5, с. 594–605
УДК 577.123
Нуклеотидная последовательность гена и особенности основного белка внешней мембраны вирулентного штамма Rickettsia prowazekii
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Rickettsia prowazekii, РРlаза, вирулентность, sec А.
Аннотация
Определена нуклеотидная последовательность гена 29,5 кДа – основного белка внешней мембраны (МОМР) штамма Брейнль Rickettsia prowazekii. Ген содержит открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид из 282 аминокислотных остатков с подсчитанной молекулярной массой 31549 Да. В N-концевой части аминокислотной последовательности обнаружена структура с характеристиками сигнального пептида. Синтезируемый в Escherichia coli гетерологичный 29,5 кДа-антиген секретируется в периплазму. Показан значительный уровень сходства полипептида с пептидил-пролил-цис/транс-изомеразой Е. coli и другими белками семейства парвулина. Гены МОМР вирулентных штаммов Брейнль и ЕВир и вакцинного штамма Е амплифицироваиы с использованием специфических праймеров и клонированы в экспрессионный вектор pQE-ЗО. Показано, что кодируемые рекомбинантными ДНК полипептиды не различаются по подвижности при электрофорезе в Ds-Na-ПААГ, в то время как нативный МОМР штамма Брейнль, как известно, отличается от соответствующих белков штаммов Е и ЕВир. Кроме того, рестрикционным анализом продуктов полимеразной цепной реакции (PCR) не обнаружено различий в ORE 29,5 кДа-белков трех штаммов. В работе обсуждаются возможная роль парвулиноподобного белка (Р1р) в вирулентности возбудителя сыпного тифа и природа межштаммовых различий. Вблизи гена plp на другой цепи ДНК обнаружено начало гена, кодирующего субъединицу SecA транслоказы секреторных белков.