БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 4, с. 497–501
УДК 577.152.3
Очистка и некоторые свойства тирозиназы из Aspergillus flavipes 56003
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: тирозиназа, Aspergillus.
Аннотация
Разработан метод выделения и очистки тирозиназы из биомассы гриба Aspergillus flavipes 56003. Метод включает экстракцию тирозиназы из биомассы водой, концентрирование с применением ДЭАЭ-целлюлозы, гель-фильтрацию на Акрилекс П-150 и ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-Тойоперле 650М. Согласно электрофорезу в ПААГ и ультрацентрифугированию, полученный препарат тирозиназы гомогенен. Молекулярная масса тирозиназы составляет около 130 кДа, изоэлектрическая точка pH 4,6. Тирозиназа содержит два атома меди. Величины Кт и Vm для гидроксилирования тирозина при pH 6,8 составляют 0,3 мМ и 1300 мкмоль/мин • мг, а для дегидрогенизации 3,4-дигидроксифенилаланина (ДОФА) – 5 мМ и 16 000 мкмоль/мин • мг соответственно. Гидроксилирование монофенолов имеет характерный лаг-период. Скорость окисления тирозина и ДОФА максимальна в области pH 6,0-6,8. При 50° время полуинактивации фермента составляет 40 мин. Гидроксилазная активность тирозиназы более стабильна в нейтральной среде, а дегидрогеназная – в кислой (pH 4,0). Спектр абсорбции тирозиназы характеризуется пиком при 290 им и плечом в области 320-400 нм.