БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 3, с. 412–420
УДК 577.123
Апоптоз нестимулированных лимфоцитов человека и разрывы ДНК, индуцированные ингибитором топоизомеразы II этопозидом
Поступила в редакцию 16.04.1998
После доработки 25.06.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: лимфоциты, этопозид, топоизомераза II, разрывы ДНК, ДНК-кометы.
Аннотация
С помощью методу ДНК-комет, электрофореза ДНК-экстрактов, цитофлуориметрии исследовали индукцию этопозидом VP-16 разрывов ДНК, их репарацию и апоптоз покоящихся лимфоцитов крови человека. Показали, что VP-16 (50-200 мкг/мл, инкубация в течение 3 или 24 ч) индуцирует апоптоз в нестимулированиых лимфоцитах крови человека in vitro. Этот вывод основывается на результатах морфологических исследований клеток, оценке доли гиподиплоидных клеток и оценке межнуклеосомной деградации ДНК в лимфоцитах. Проявлению этих общепринятых признаков апоптоза предшествует формирование разрывов ДНК под действием этопозида. Число однонитевых разрывов пропорционально изменялось с изменением концентрации VP-16; они были репарированы в течение 2-3 ч после удаления агента из инкубационной среды.Очевидно, однонитевые разрывы обусловлены гидроксилом в С4′-положении диметоксифенольного кольца этопозида. Двуиитевые разрывы сохраняются нерепарированными в течение 20 ч после смены инкубациоииой среды. Их число, так же как и доля клеток, имеющих апоптотическую морфологию ядра, не изменялось с изменением концентрации VP-16 и/или длительности инкубации клеток с агентом. Мы предполагаем, что цитотоксическое действие VP-16 на нестимулированных лимфоцитах опосредуется одной из изоформ топоизомеразы II – топоизомеразой II-β, которая локализована в ядрышке и не связана с клеточным циклом.