БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 2, с. 255–261
УДК 577.122
Изучение взаимодействий ядерных белков клеток млекопитающих с GCC-элементом, входящим в состав композитного цис-элемента промотора гена рибосомного белка мыши L32
Поступила в редакцию 01.06.1998
После доработки 19.08.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ген rpL32 мыши, цис-элементы, ДНК-связывающиеся белки, транскрипционные факторы, GCC-элемент.
Аннотация
Методами задержки в геле (гель-ретардации) и лигандного блоттинга изучено образование ДНК-белковых комплексов между нуклеотидной последовательностью GC(GCC)4 (GCC-элементом) промотора гена рибосомного белка мыши L32 (rpL32) и ядерными белками клеток мыши и человека. Показано, что способность участка (-24…+11) промотора гена rpL32 образовывать специфические комплексы с ядерными белками мыши и человека обусловлена в значительной мере содержащимся в этом фрагменте GCC-элементом (- 19…- 6). Число и характер образующихся ДНК-белковых комплексов имеют выраженную тканеспецифичность. Методом лигандного блоттинга выявлены три ядерных полипептида в клетках HeLa (~18,28 и 50 кДа),связывающихся с областью (-24…+11) промотора гена rpL32. Показано, что по меньшей мере один из них (18 кДа) взаимодействует непосредственно с GCC-элементом. Тот же фрагмент промотора взаимодействует только с одним ядерным полипептидом (28-31 кДа) фибробластов человека. Формирование ДНК-белковых комплексов между исследуемым участком промотора гена rpL32, содержащим GCC-элемент, и ядерными белками фибробластов человека зависит от ионов Zn2+. Методов функционального титрования (конкуренции in vivo в CAT-тесте) установлено, что в клетках NIH ЗТЗ GCC-элемент в составе промотора rpL32 функционирует как позитивный регулятор транскрипции. Таким образом, представленные результаты характеризуют последовательность GC(GCC)4 как функционально активный цис-элемент, входящий в более сложный (композитный) цис-элемент промотора гена rpL32 мыши, проявляющий тканеспецифические свойства. В различных типах клеток млекопитающих GCC-элемент способен к взаимодействию с разными ядерными белками, причем характер этих взаимодействий может определяться его локализацией относительно других цислементов в регуляторных участках генов.