БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 2, с. 234–238
УДК 577.152.3
Сайт-специфическая эндонуклеаза Nsp LKI — изошизомер эндонуклеазы HaeIII
Поступила в редакцию 16.04.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: сайт-специфическая эндонуклеаза, изошизомер, фосфоцеллюлоза, гепарин-сефароза, оксиапатит.
Аннотация
Из почвенной бактерии Nocardia species LK выделена и очищена до функционально чистого состояния сайт-спсцифическая эндонуклеаза NspLKI. Препарат получен последовательными хроматографиями на колонках с фосфоцеллюлозой. оксиапатитом НТР и гепарин-сефарозой. Выделенный фермент узнает на ДНК последовательность 5′-GG↓CC-3′ и расщепляет ее, как показано стрелкой, т.е. является изошизомером НаеIII. Конечный выход фермента 1 • 105 и на грамм сырой биомассы. Фермент активен в диапазоне температур 25-60° с оптимумом при 48-55o̥; не теряет активности при хранении в течение 3-х суток при комнатной температуре, оптимален буфер HRB, содержащий 10 мМ Tris-HCl, pH 7,4, 200 мкг/мл альбумина, 10 мМ MgCl2, 100 мМ NaCl.