БИОХИМИЯ, 1999, том 64, вып. 1, с. 44–51
УДК 577.355.2
Неденатурирующий электрофорез. Фракционирование фотосинтетических пигмент-белковых комплексов и белков плазмы крови
Поступила в редакцию 11.06.1998
После доработки 05.09.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: неденатурирующий препаративный электрофорез, додецилсульфат натрия, пиг-мент-белковые комплексы фотосинтетических мембран, белки плазмы крови.
Аннотация
Предлагается эффективный электрофорез лабильных белков и белковых комплексов в ПААГ. При наличии в электродном буфере 0,001-0,01%-ного Ds-Na не проявляется денатурирующая активность этого детергента и обеспечивается высокая разрешающая способность электрофореза. При фракционировании фотосинтетических пигмент-белковых комплексов Anacystis nidulans R2 и других цианобактерий даже лабильная фотосистема 2 сохраняет молекулярную структуру и кислородвыделяющую активность. Сумма спектров по-глощения или флуоресценции выделенных пигмент-белковых комплексов совпадает с соответствующим спектром исходной фотосинтетической мембраны. Распределение хлорофилла между компонентами фотосинтетического аппарата по данным спектрального анализа и денситометрии этих компонентов в геле также совпадает. Получены более 15 электрофоретических фракций пигмент-белковых комплексов из хлоропластов зеленых водорослей и высших растений, в том числе несколько фракций PS1, спектрально различающиеся светособирающие комплексы LHCP и их олигомеры. Высокая разрешающая способность электрофореза продемонстрирована также на белках плазмы крови. Малая денатурирующая активность и низкая ионная сила применяемого буфера позволили проводить электрофорез в трубках большого диаметра (3,5 и 8 см). Сведены к минимуму время разрушения клеток и время растворения мембран. Опробован метод электрофоретического окрашивания геля. Раскрываются широкие возможности применения электрофореза.