БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 11, с. 1537–1542
УДК 577.322.037
Инактивация и конформационные изменения дрожжевой алкогольдегидрогеназы в растворах трифторэтанола
Поступила в редакцию 10.02.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: дрожжевая алкогольдегидрогеназа, трифторэтанол, инактивация, конформационные измерения.
Аннотация
Конформационные изменения дрожжевой адкогольдегидрогеназы в растворах трифторэтанола изучены с использованием методов белковой флуоресценции и кругового дихроизма. В относительно малых концентрациях (<5%) трифторэтанол действует как обратимый ингибитор конкурентного типа по отношению к этанолу и неконкурентного типа по отношению к NAD+. Константы ингибирования для нативной алкогольдегидрогеназы и ферментной формы, в которой удален структурно-связанный цинк, были определены равными 5,8 и 1,1 мМ соответственно, что свидетельствует о повышении гибкости активного центра после удаления структурно-связанного цинка. При более высоких концентрациях трифторэтанола происходит необратимая инактивация фермента. Сопоставление инактивации и конформационных изменений дрожжевой алкогольдегидрогеназы при денатурации трифторэтанолом показывает, что при одной и той же концентрации трифторэтанола степень инактивации превышает степень конформационных изменений. Результаты измерений кругового дихроизма свидетельствуют о том, что трифторэтанол может индуцировать образование вторичной структуры фермента.