БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 9, с. 1222–1230
УДК 577.152.6
Аффинная модификация фенил аланил-тРНК-синтетазы Тhermus thermophilus транскриптами тРНКPhe, содержащими 4-тиоуридин
Поступила в редакцию 10.02.1998
После доработки 23.04.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: аффинная модификация, 4-тиоуридин, тРИКРhe, фенилаланил-тРНК-синтетаза, Thermus thermophilus.
Аннотация
Фотореакциоииоспособные производные тРНКPhе, содержащие остатки 4-тиоуридина (s4U), синтезированы с помощью системы транскрипции Т7 РНК-полимеразы. Полная замена 16 остатков U на s4U ([16s 4U]-tPHKPhe) приводит к 14-кратному уменьшению каталитической эффективности аминоацилирования транскрипта тРНКPhe фенилаланил-тРНК-синтетазой Т. thermophilus. [ls4U]-тPHKPhe, полученная статистическим включением остатков s4U с последующим выделением s4U-монозамещенных молекул РНК на аффинном геле, имеет те же кинетические параметры в реакции аминоацилирования, что и траискрипт тРНК. Показано ковалентное присоединение s4U-содержащих транскриптов тРНКPhe к фенилаланил-тРНК-синтетазе и доказана специфичность модификации. Наблюдаемая стехиометрия модификации свидетельствует о том, что исследуемый фермент является функциональным димером. Модификация приводит к мечению как α-, так и β-субъединиц фермента, имеющего олигомерную структуру α2β2 и образованию продуктов «сшивки» субъединиц при модификации [16s4U]-тPHKPhe. Преимущественная модификация α -субъединицы указывает на существование контактов тРНК с ферментом, которые не входят в число расшифрованных с помощью рентгеноструктурного анализа.