БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 8, с. 1090–1096
УДК 577.123
Аффинная модификация ДНК-полимеразы из Тhermus thermophilus и ДНК-матрицы с помощью фотореакционноспособных производных dCTP
Поступила в редакцию 10.02.1998
После доработки 05.05.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: термофильная ДНК-полимераза, фотоаффинная модификация.
Аннотация
Изучены субстратные свойства аналогов dCTP: N4-|2-(4-азидотетрафторбензоиламино)-этил]-2′-дезоксицитидин-5′-трифосфата (FABdCTP), 5-[N -(4-азидотетрафторбензоил)-3-амино-транс-пропенил-1]-2′-дезокси-цитидин-5′-трифосфата (AlFABdCTP) и N4-[2-(2-нитро-5-азидобензоиламино)-этил]-2′-дезоксицитидии-5′-трифосфата [NABdCTP) в реакции синтеза ДНК, катализируемой ДНК-полимеразой из экстремально тер-мофильной бактерии Thermus thermophilus В 35 (Tte ДНК-пол). Проведена фотоаффинная модификация этого фермента с использованием указанных производных dCTP, причем N 4-[2-(2-нитро-5-азидобензоила-мино)-этил]-2′-дезоксицитидин-5′-трифосфат (NABdCTP) был использован впервые. Проведена комплемен-тарно адресованная модификация ДНК-матрицы фотоактивным праймером, синтезированным in situ Tte ДНК-пол с использованием N4-[2-(4-азидотетрафторбензоиламино)-этил]-2′-дезоксицитидин-5′-трифосфата (FABdCTP) и 5-[N4-(4-азидотетрафторбензоил)-3-амино-транс-пропенил-1]-2′-дезоксицитидин-5′-трифосфа-та (AlFABdCTP). Показано, что эффективность модификации ДНК-матрицы зависит от типа используе-мой фотоактивной группы.