БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 6, с. 833–841
УДК 577.122
Свойства рекомбинантного белка хвостового чехла бактериофага T4 и его делеционных фрагментов
Поступила в редакцию 29.10.1997
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: бактериофаг Т4, сократимый чехол, продукт гена 18, фолдинг, белковая инженерия, вектор экспрессии, мутагенез.
Аннотация
Сконструирован вектор экспрессии рекомбинантного белка хвостового чехла бактериофага Т4 (пг18) в клетках Escherihia coli под контролем промотера фага Т7. Полноразмерный рекомбинантный пг18 (659 аминокислотных остатков) полимеризуется in vivo в протяженные поличехлы. С целью изучения механизмов фолдинга пг18 сконструировано шесть векторов, экспрессирующих делеционные мутанты белка. Три белка – 1N, 2N и 3N – содержат соответственно 268, 316 и 372 аминокислотных остатков N-концевой области пг18. Три других фрагмента – 1C, 2С и ЗС – содержат соответственно 455, 356 и 288 аминокислотных остатков С-концевой области пг18. Фрагменты 1N, 2N, 1C, 2С и ЗС при экспрессии образуют нерастворимые агрегаты. Однако фрагмент 3N накапливается в цитоплазме клетки в растворимой форме и не формирует полимерные структуры, что позволило разработать для него эффективный метод очистки. Изучено взаимодействие специфических моноклональных антител к рекомбинантному пг18 с полученными фрагментами белка, а также с чехлом фага до и после сокращения. Фрагмент 3N, по-видимому, представляет стабильный домен нативного пг18, формирующего сократимый чехол фага.