БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 6, с. 773–780
УДК 577.152.6
Аденилосукцинат-синтетаза дрожжей Saccharomyces cerevisiae: очистка и свойства
Поступила в редакцию 22.06.1997
После доработки 11.01.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: дрожжи Saccharomyces cerevisiae, биосинтез пуриновых нуклеотидов, ген ADE12, аденилосукцинат-синтетаза.
Аннотация
Впервые сообщается о свойствах аденилосукцинат-синтетазы (АСС) дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Разработана четырехстадийная схема выделения и очистки фермента из клеток штамма-продуцента, включающая хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе, фосфоцеллюлозе и гепарин-агарозе. Определены pH- и температурный оптимумы активности АСС (7,0 и 35° соответственно). Изучены pH- и термостабильность фермента. Нативная форма фермента – димер. Величины Кm для IMP, GTP и L-аспартата равны 1,7, 0,16 и 6,7 мМ соответственно. АТР не может заменить GTP в качестве субстрата, a 2′-dGTP и dd-GTP могут. ITP служит субстратом и как аналог GTP, и как аналог IMP. Впервые обнаружено ингибирование АСС промежуточными продуктами биосинтеза пуриновых нуклеотидов 5-амино-4-(N-сукцинокарбоксамид)- и 5-амино-4-карбомоил-имидазолрибонуклеотидами (САИКАР и АИКАР соответственно). NH2OH и аналоги аспартата не являются субстратами, но многие являются ингибиторами; для эффективного связывания важно наличие четырехуглеродного скелета и незамещенной аминогруппы; заряженность β-карбоксильной группы не обязательна. На основании результатов сравнительного анализа первичных структур и субстратных специфичностей САИКАР-синтетазы и АСС дрожжей высказано предположение о независимом происхождении этих белков.