БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 5, с. 672–677
УДК 577.23
Дискриминация конформационных состояний митохондриального цитохрома P-450scc селективной модификацией пиридоксаль-5-фосфатом
Поступила в редакцию 25.09.1997
После доработки 22.11.1997
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цитохром Р-450 терминальная монооксигеназа, химическая модификация, аффинная хроматография, динамическое равновесие конформеров.
Аннотация
Показано, что электрофоретически гомогенный цитохром P-450scc, очищенный по традиционной методике из митохондрий коры надпочечников, содержит две формы белка, различающихся по доступности участков полипептидной цепи к специфической химической модификации пиридоксаль-5-фосфатом. Форма белка, у которой аминогруппы остатков лизина доступны для модификатора, составляет приблизительно 60-70% и после ковалентного присоединения пиридоксаль-5-фосфата теряет сродство к адренодоксину и ферментативную активность. Эта форма гемопротеина может быть отделена аффинной хроматографией на Адренодоксин-сефарозе. Форма цитохрома Р-450, не имеющая NH2-групп, доступных для модификатора, удерживается аффинной матрицей и после элюирования ее с Ад-сефарозы имеет спектр, характерный для высокоспиновой формы белка и спектральный индекс гомогенности А 392/А278 , равный 1,0. Ферментативная активность формы гемопротеина, в которой аминогруппы остатков лизина не способны модифицироваться, была идентична активности исходного препарата.