БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 5, с. 652–660
УДК 577.112
Специфичность гуморального и клеточного иммунного ответа на рекомбинантные частицы белка нуклеокапсида вируса гепатита в человека у кроликов
Поступила в редакцию 05.09.1997
После доработки 20.11.1997
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: вирус гепатита В человека, белок нуклеокапсида, рекомбинантные частицы, структура, иммунногенность, В-клеточные эпитопы, Т-клеточные эпитопы.
Аннотация
Белок нуклеокапсида вируса гепатита В человека (HBcAg) вызывает мощный гуморальный и клеточный иммунный ответ, являющийся важным компонентом протективного иммунитета. Кроликов иммунизировали частицами, образованными рекомбинантными молекулами HBcAg, несущими гетерологичные последовательности на N-конце [1], и исследовали специфичность гуморального и клеточного ответа на HBcAg и отдельные эпитопы из его состава. По иммунологическим свойствам рекомбинантные частицы не отличались от частиц, образуемых исходным HBcAg. Рекомбинантные частицы оказались не токсичными для периферических клеток крови (РВМС) иммунизированных и неимунных животных ex vivo. Пролиферативный ответ РВМС (фактически, Т-лимфоцитов) на HBcAg у иммунизированных животных возрастал пропорционально увеличению концентрации частиц HBcAg в среде в широком интервале (10-104 нг/мл). Для Т-лимфоцитов HBV-инфицированных лиц, напротив, ранее был зарегистрирован колоколообразный характер концентрационной зависимости, связанный, возможно, с цитопатическим эффектом HBcAg на экспрессирующие его клетки. Проведено сравнение специфичности гуморального и клеточного иммунного ответа на частицы HBcAg у иммунизируемых животных и при естественной инфекции человека вирусом гепатита В (HBV). Иммунизация рекомбинантными частицами HBcAg вызвала мощный иммунный ответ: титр анти HBcAg антител достигал 2 ∙107. Выработке антител против HBcAg во всех случаях предшествовал Т-клеточный ответ на белок и отдельные пептиды из его состава, аналогично тому как это происходит у человека при острой вирусной инфекции. Доминантный универсальный (гаплотип-независимый) Т-клеточный эпитоп (аминокислотные остатки (ак) 61-85 HBcAg (р61-85)) распознавался Т-клетками всех животных. На ранних стадиях иммунизации наблюдали образование антител, распознающих р61- 85, хотя до сих пор иммунодоминантный В-клеточный эпитоп, располагающийся в этой области, считался чисто конформационным. Последовательность, представляющая другой кластер иммунодоминантных Т-клеточных эпитопов у HBV-инфицированных лиц и иммунизированных мышей, ак 121-140 (р121-140), не была иммуногенна на Т-клеточном уровне. Оказалось, однако, что иммунизация частицами HBcAg вызывает продукцию анти р121- 140 антител в высоком титре, несмотря на принятое представление об отсутствии перекрестного В-клеточного распознавания HBcAg и р121- 140. Предположение о том, что продукция анти р121-140 антител вызвана нативными частицами, а не денатурированными молекулами белка, подтверждается распознаванием частиц HBcAg антителами против синтетических пептидов, представляющих участок ак 120-140 HBcAg. Полученные данные указывают на экспонированность этого участка на поверхности частиц.