БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 4, с. 573–576
Краткие сообщения
УДК 577.152
Размеры белков и стехиометрия в шапероновом комплексе SecB — RBPTI, оцениваемые по флуоресценции ANS
Поступила в редакцию 23.01.1998
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: шаперон, SecB, флуоресценция, ANS.
Аннотация
Взаимодействие шаперона SecB из Е. coli c модельным белком – восстановленной формой трипсинового ингибитора из поджелудочной железы быка (RBPTI) – изучалось in vitro с использованием флуоресцентного зонда ANS. Связывание RBPTI с SecB, меченным ANS, сопровождалось увеличением интенсивности и «синим» сдвигом флуоресценции зонда. В обоих белках и их комплексе обнаруживаются два центра излучения зонда: короткоживущий центр (время жизни возбужденного состояния ~1 нс), в котором флуоресценция ANS сильно гасится полярными аминокислотными остатками, и долгоживущий центр (6-12 нс), где ANS высвечивает из гидрофобного кармана. С помощью измерения времени жизни и степени поляризаций флуоресценции, подставляемых в модифицированное уравнение Левшина-Перрена, были оценены эффективные объемы и диаметры RBPTI, SecB и комплекса SecB-RBPTI. Диаметр SecB составляет 33,4 А, диаметр шаперонового комплекса – 49,8 А. Объем комплекса равен сумме объемов одного тетрамерного SecB и четырех молекул RBPTI, Связывание молекул RBPTI с SecB – это не встраивание полипептидов в большую шапероновую «пору» между тетрамерами, как предполагалось ранее, а «налипание» четырех полипептидных молекул на четыре субъединицы шаперона.