БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 4, с. 491–499
УДК 577.15.03
Рефолдинг белков с участием искусственных шаперонов
Обзор
Поступила в редакцию 10.09.1997
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: рефолдинг, искусственные шапероны, карбоангидраза В, лизоцим, цитратсинтаза, креатинкиназа, детергенты, циклодекстрины.
Аннотация
В обзоре обсуждается новая двухстадийная методика рефолдинга белков in vitro с участием искусственных шаперонов, предложенная Роземой и Геллманом. Методика предложена по аналогии с двухстадийным механизмом функционирования GroE-системы. На первой стадии, в условиях, которые обычно приводят к необратимой агрегации белка (нагревание или удаление денатурирующего агента), белок захватывается детергентом. На второй стадии проводится удаление детергента из комплекса с белком, что достигается связыванием детергента путем образования комплексов включения с циклодекстрином. Эта процедура обеспечивает возможность рефолдинга белка. Очистка ренатурированного белка с участием искусственных шаперонов (детергента и циклодекстрина) проводится в две стадии. После завершения процесса рефолдинга раствор пропускают через 0,22 мкм-фильтр для освобождения от агрегированного белка, а затем через фильтр с размерами пор, допускающими прохождение веществ с молекулярной массой до 10 кДа. При второй фильтрации удаляются искусственные низкомолекулярные шапероны и задерживается ренатурированный белок. Обсуждается использование методики рефолдинга белков с использованием искусственных шаперонов для ренатурации карбоангидразы В из эритроцитов человека, лизоцима из белка куриных яиц, цитратсинтазы из сердца свиньи и креатинкиназы из скелетных мышц кролика (ММ-изофермент).