БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 3, с. 308–326
УДК 577.322.037
Денатурированные состояния дрожжевой фосфоглицераткиназы
Обзор
Поступила в редакцию 10.07.1997
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: дрожжевая фосфоглицераткиназа, денатурация кислотой, холодовая денатурация, круговой дихроизм, рассеяние рентгеновских лучей, динамическое светорассеяние.
Аннотация
Изучение белков в развернутых состояниях имеет большое значение для решения проблемы фолдинга белков и понимания механизма транслокации полипептидных цепей. Развернутые формы дрожжевой фосфоглицераткиназы (ФГК), полученные в результате денатурации кислотой и холодовой денатурации и после воздействия 6 М гуанидингидрохлорида (GuHCl), представляют собой ансамбли быстро взаимопревращающихся структур индивидуальных полипептидных цепей. Эти структуры различаются между собой физическими свойствами, такими как размер клубка и жесткость на коротких расстояниях вдоль цепи. Указанные свойства полипептидных цепей могут быть удовлетворительно описаны с помощью статистики персистентных цепей. Раствор, содержащий 0,7 М GuHCl, при 4,5° является почти истинным 0-растворителем для ФГК. Молекулы ФГК, денатурированной кислотой, при низких значениях ионной силы представляют собой максимально вытянутые и максимально жесткие цепи. Конформация ФГК, денатурированной нагреванием, должна быть более компактной, чем конформация статистического клубка в 0-точке. Этот вывод сделан на основании измерений, проведенных с другими белками. Исследования термоденатурированной ФГК с помощью методов светорассеяния и рассеяния рентгеновских лучей невозможны вследствие агрегации белка. Персистентная длина как мера жесткости цепи варьирует от а = 1,74 нм для ФГК, денатурированной выдерживанием на холоду, до а= 3,0 нм для ФГК, денатурированной кислотой. На основании данных по рассеянию рентгеновских лучей для всех развернутых состояний рассчитаны функции распределения радиусов вращения, проведено сопоставление последних с радиусом вращения для нативной молекулы.