БИОХИМИЯ, 1998, том 63, вып. 2, с. 183–189
УДК 577.123
Изменения структурной организации нуклеосомной нити в процессе активации протоонкогенов
Поступила в редакцию 28.11.1996
После доработки 13.08.1997
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: хроматин, нуклеосомная нить, протоонокгены, гепатоциты крыс.
Аннотация
Исследовали динамику структурных изменений хроматина клеток печени крыс в процессе активации протоонкогенов c-myc, c-fos и c-jun. В ядрах, изолированных на разных стадиях активации генов циклогексимидом, проводили ограниченный нуклеолиз хроматина эндогенной Ca2+/Mg2+-ДНКазой, экстрагировали хроматин в буфер с низкой концентрацией ионов магния и анализировали характер фрагментации нуклеосом. Для этого из растворимого хроматина выделяли ДНК и разделяли низкомолекулярные фрагменты методом электрофореза в составном геле из 3 и 1%-ной агарозы. Такая модификация метода электрофореза ДНК повышает эффективность разделения низкомолекулярных фрагментов ДНК. Показано, что с увеличением активности протоонкогенов снижается количество чувствительного к ДНКазе растворимого хроматина. При этом в растворимом хроматине увеличивается относительное содержание гена c-fos. В контрольных ядрах эндогенная Ca2+/Mg2+-ДНКаза выщепляет мононуклеосомы с фрагментами ДНК разной длины. С началом активации протоонкогенов выделяются преимущественно моно- и ояигоиуклеосомы с удлиненными фрагментами ДНК. Описанные изменения захватывают примерно 40% хроматина ядра. Полученные результаты дают основание предполагать, что активация протоонкогенов сопряжена с реорганизацией нуклеосомного уровня структурной организации хроматина.