БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 12, с. 2103–2115
УДК 577.152.1
Селективная химическая модификация цитохрома P450scc (CYP11A1) дииодофлуоресцеиниодацетамидом в исследовании роли и топологии междоменного участка молекулы гемопротеина
Поступила в редакцию 28.04.1996
После доработки 07.08.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: кора надпочечников, цитохром P450scc, химическая модификация, липосомы, мембранная топология, дииодофлуоресцеиниодацетамид.
Аннотация
Проведена селективная химическая модификация цитохрома P450scc (CYP11A1) флуоресцентным SH-реагентом – дииодофлуоресцеиниодацетамидом (DIFIA). Показано, что модификации селективно подвергается остаток Cys264 цитохрома P450scc. Модификация оказывает влияние на каталитическую активность растворимого и мембраносвязанного белка в реакции гидроксилирования холестерина в реконструированной системе. Снижение активности коррелирует с уменьшением сродства цитохрома P450scc к промежуточному переносчику электронов – адренодоксину. Цитохром P450scc доступен модификации и в составе протеолипосом, причем модифицированный мембраносвязанный белок способен расщепляться трипсином с образованием двух крупных фрагментов F1 и F2, соответствующих N – и С-концевым участкам молекулы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что фрагмент молекулы цитохрома P450scc, содержащий остаток Cys264, экспонирован на поверхности белковой глобулы, расположен вне мембраны и, по-видимому, принимает участие в реализации белок-белковых взаимодействий.