БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 10, с. 1898–1903
УДК 577.152.4
Очистка и свойства изоцитратлиазы и малатсинтазы из печени голодающих крыс
Поступила в редакцию 04.06.1996
После доработки 10.07.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: глиоксилатный цикл, голодание, изоцитратлиаза, малатсинтаза, очистка, кинетические характеристики.
Аннотация
Активность ключевых ферментов глиоксилатного цикла изоцитратлиазы и малатсинтазы обнаружена в печени голодающих крыс. Ферменты синтезировались па третий день пищевой депривации и достигали максимальной активности к 5-му дню голодания. Удельная активность изоцитратлиазы составила 0,06 ед. на 1 мг белка, малатсинтазы – 0,03 ед. на 1 мг белка. Для выделения и очистки изоцитратлиазы были использованы фракционирование сульфатом аммония, хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе и гель-фильтрация на Toyopearl НW-65. В результате был получен ферментный препарат с удельной активностью 9,0 ед. на 1 мг белка и выходом 8,1%. С помощью гель-фильтрации установлено, что молекулярная масса изоцитратлиазы составляет 145 кДа. Изучение каталитических характеристик изоцитратлиазы показало, что фермент подчиняется кинетике Михаэлиса-Ментен (Km по изоцитрату 0,07 мМ), конкурентно ингибируется глюкозо-1-фосфатом (Кi = = 1,1 мМ), глюкозо-6-фосфатом (Кi = 1,9 мМ) и активируется в присутствии ADP, pH оптимум фермента 7,4. Малатсинтаза была частично очищена с помощью преципитации сульфатом аммония и гель-фильтрации па сефадексе G-25. Уровень удельной активности полученного препарата составил 0,15 ед. на 1 мг белка с выходом 45%. Для малатсинтазы значения Km составили 0,2 мМ по ацетил-СоА и 3,0 мМ по глиоксилату, pH оптимум 7,6.