БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 9, с. 1637–1647
УДК 577.1+547-963
Кристаллизация ковалентно-сшитого комплекса адренодоксина и адренодоксинредуктазы
Поступила в редакцию 14.02.1996
После доработки 13.05.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: адренодоксин, адренодоксинредуктаза, гетерологическая экспрессия в Е coli, ковалентно-сшитые комплексы, стероидогенный транспорт электронов, кристаллизация.
Аннотация
Выделены, очищены до гомогенного состояния и биохимически охарактеризованы две формы митохондриальной адренодоксинредуктазы из коры надпочечников быка, а также рекомбинантные адреиодоксипредуктаза и адренодоксип, экспрессированные в Escherichia coli. Показано, что рекомбинантная адреиодоксипредуктаза экспрессируется в виде единственной формы белка, совпадающей но времени удерживания на ионообменном сорбенте со второй формой митохондриальной редуктазы. Две формы редуктазы обладают близкими величинами каталитической активности в реакциях восстановлении адренодоксина в двух типах систем, включающих цитохром с или цитохром Р-450(11β) в качестве акцептора электронов. Реакцией с 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимидом получен ковалентно-сшитый белковый комплекс каждой из двух форм адренодоксинредуктазы с адренодоксином. Предложен эффективный двухстадийиый метод очистки ковалентно-сшитых бимолекулярных гетерологических комплексов белков, позволяющий получать эти комплексы в гомогенном состоянии с сохранением их функциональной активности. Впервые закристаллизован ковалентно-сшитый бимолекулярный комплекс адренодоксинредуктазы с адренодоксином.