БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 9, с. 1589–1599
УДК 517.152.2
Обнаружение у дрожжей Pichia guilliermondii термостабильной рибофлавинкиназы и исследование ее свойств
Поступила в редакцию 01.06.1995
После доработки 22.05.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: рибофлавин, флавинмононуклеотид, рибофлавинкиназа, термоинактивация, термостабильный фермент.
Аннотация
При исследовании процесса термоинактивации рибофлавинкиназы (АТР : рибофлавин-5′-фосфотрансферазы) в бесклеточных экстрактах дрожжей Р. guilliermondii обнаружено, что реакцию фосфорилирования рибофлавина в клетках этого организма катализируют два фермента, один из которых отличается высокой термостабильностью. Константа скорости kин при 90° для одного фермента составляет 11,2∙10-4 с- 1, для другого – 4,0∙10-2 с- 1. Обнаруженные рибофлавинкиназы не разделяются при фракционировании дрожжевых белков сульфатом аммония, ионообменной и гель-проникающей хроматографии. Ферменты разделены и очищены при помощи аффинной хроматографии бесклеточных экстрактов дрожжей на голубой сефарозе CL-6B с элюцией AТР. Показано, что менее устойчивый к действию температуры фермент по своим свойствам соответствует ранее описанной рибофлавинкиназе из дрожжей Р. guilliermondii, термостабильный фермент отличается от нее температурным и pH-оптимумом, характеризуется более высокой энергией активации реакции фосфорилирования рибофлавина и проявляет очень высокое сродство к рибофлавину (Кт = 0,65 мкМ) и AТР (Km = 0,7 мкМ).